Page 57 - 《环境工程技术学报》2022年第5期

第 5 期 董婧等：基于微生物生物完整性指数的北京市城市河道生态系统健康评价 · 1413 ·

3 条城市河道以再生水厂出水作为补给水源，自西向 兴、通州等区，于榆林庄闸上游汇入北运河。在凉水
东流经人类活动密集的城区。清河从北京市海淀区 河 设 置 5 个 采 样 点 （LSH1 、LSH2 、LSH3 、LSH4、
颐和园西北角的安河闸起〔北长河（京密引水渠）与 LSH5）。大龙河为北京市境内的河流，起自黄村南铁
北旱河汇合处〕向东北流，经肖家河、朱房村、清河、 道口闸，从西北向东南流经大兴县 的 4 个乡镇，至白
河北村、立水桥、沈家村、沙子营后，在立水桥以东 塔村东与小龙河汇合。在大龙河设 置 4 个采样点
入温榆河。在清河设置 4 个采样点（QH1、QH2、 （DLH1、DLH2、DLH3、DLH4）。河流采样点如 图 1
QH3、QH4）。凉水河流经石景山、丰台、朝阳、大 所示。

图 1 条城市河道采样点位置
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Fig.1 Location of 4 urban river sampling points

1.2 样品采集与分析 退火 30 s, 72 ℃ 延伸 30 s），然后 72 ℃ 稳定延伸 10
1.2.1 样本采集和水质分析 min，最后 在 4 ℃ 进行保存（PCR 仪：ABI GeneAmp®
于 202 年 9 月—202 年 3 月进行样品的采 9700 型）。PC 反应体系：5×TransStart FastPf 缓冲
u
0
R
1
集。每个点位各采 样 3 次（冬季有的河道结冰未采 液 4 µL，2.5 mmol/L dNTPs 2 µL，上游引物（5 µmol/L）
样）。水样和沉积物样品的采集与分析参照《水与废 0.8 µL ， 下 游 引 物 （5 µmol/L ）0.8 µL ，TransStart
水监测分析方法》 [18 ] 进行，同时测定化学需氧量 FastPfu DN 聚合 酶 0.4 µL，模 板 DNA 10 ng，补足
A
（COD ）、总磷（TP）、石油类、氨氮（NH -N）、溶解 至 20 µL。每个样 本 3 个重复，取平均值。
Cr 3
氧 （DO ） 、 生 化 需 氧 量 （BOD ） 、 总 氮 （TN ） 、As、 1.2.3 Illumina Mise 测序
q
5
p 等指标。 将同一样本 的 PC 产物混合后使 用 2 % 琼脂糖
H
R
1.2.2 DNA 抽提和 PCR 扩增 凝胶回 收 PC 产物，利 用 AxyPrep DNA Gel Extraction
R
根 据 FastDNA® Spin Kit for Soil (MP Biomedicals， Kit (Axygen Biosciences, 美 国 进 行 回 收 产 物 纯
)
美国 说明书进行微生物群落 总 DN A 抽提，使用 化 ，2 % 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 检 测 ， 并 用 Quantus™
)
1 % 的琼脂糖凝胶电泳检 测 DN A 的提取质量，使用 Fluorometer (Promega, 美国) 对回收产物进行检测定
NanoDrop200 测定 DN A 浓度和纯度；使用 338F 量。使用 NEXTFLEX Rapid DNA-Seq Ki 进行建
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t
(5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3’ 和 ) 806R (5’- 库：1 接头链接；2 使用磁珠筛选去除接头自连片
)
)
GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3’ 对 ) 16S rRN 基 段；3 利 用 PC 扩增进行文库模板的富集；4 磁珠
)
A
)
R
因 V3～V4 可变区进 行 PC 扩增，扩增程序如下：95 回 收 PC 产物得到最终的文库。利 用 Illumin 公司
R
R
a
℃ 预变性 3 min，2 个循环（95 ℃ 变性 30 s，55 ℃ 的 Miseq PE30 平台进行测序。
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