Page 228 - 《环境工程技术学报》2023年第1期

· 224 · 环境工程技术学报 第 13 卷

射光谱扫描结果，发射波长（Ex 为 ) 447 nm。因此，
三维荧光（EEM）的 E m 范围设置 为 230～260 nm，
E 范围设置 为 250～550 nm，狭缝宽度设置 为 5 nm。
x
CI 浓度采 用 HPLC-荧光检测器检测法测定，柱温
P
为 40 ℃；流动相 为 0.05 mol/ 磷酸-乙 腈 (体积比为
L
18∶82)，流速 为 1.0 mL/min，进样量 为 20 µL；荧光检
测 器 E m 为 280 nm，E 为 450 nm。
x
1.3.2 微生物群落测试分析方法
在试验结束时，沿反应器纵 向 0～10、10～20、
20～30、30～40、40～5 以 及 50～60 c m 处分别取
0
足量填料样品（n=3）。其中，各 层 3 个平行样品的生
物膜经微生 物 DN 抽提后混合在一起，样品分别命
A
名 为 a1～ a6。采用高通量测序技术对上述样品进行
微生物群落结构特征分析。16S rDN 高通量测序
A
文库的构建和基 于 Illumina MiSe 平台的测序由上
q
海派森诺生物科技股份公司完成。其中，本试验
图 1 PHB 反硝化生物滤池装置示意 PC 扩增选用细 菌 16S rDNA 基因的高度可变的
R
V
Fig.1 Schematic diagram of PHBV supported denitrification V3～V 区特异性引物，主要包括 338F(5’-ACTC
4
biofilter
)
CTACGGGAGGCAGCA-3’ 和 806R(5’-GGACTAC
40d）测定水样 的 DO、pH、ORP；CO 采用快速消解 HVGGGTWTCTAAT-3’)。利用 TruSeq Nano DNA
D
−
分光光度法测定；NO -N、NO 以 及 NH 浓度 LT Library Prep Ki 进行建库，并 在 Illumina MiSeq
+
−
N
N
t
-
-
3 2 4
分别利用紫外分光光度法、N-（1-萘基）-乙二胺光度 平台上利 用 MiSeq Reagent Kit V3(600cycles 进 行 2×
)
法以及纳氏试剂光度法测定。 250 b 的双端测序。同时采 用 Quantiy one、Canoco、
p
根据二维荧光全光谱扫描结果，CI 有 2 个最大 Mothu 等软件分析试验数据，开展基于高通量测序
P
r
激发波长（Em)，分别 在 28 和 325 n m 处 [19] 。根据发 技术的微生物群落多样性研究。
0

表 1 PHB 反硝化生物滤池进水水质特征和运行条件
V
Table 1 Influent characteristics and operation parameters in PHBV supported denitrification biofilter
−
阶段 运行时间/d 温度/℃ 水力停留时间（HRT）/h 进水pH NO -N浓度/(mg/L) CIP浓度/(µg/L)
3
Ⅰ 1～21 13～27 24 6.85±0.31 15.60～17.03 0
Ⅱ 22～42 8～24 30 7.02±0.11 15.53～16.74 0
Ⅲ 43～52 9～27 30 7.07±0.14 15.83～17.58 100
Ⅳ 53～72 3～19 30 7.15±0.24 15.44～17.42 300
Ⅴ 73～92 −5～16 30 7.23±0.13 15.20～17.00 500
Ⅵ 93～112 −8～12 30 7.24±0.11 15.03～16.26 1 000

S
∑
Chao 指数在生态学中常用来估计物种总数（样 Shannon= − （2）
1
P i log P i
2
本中所 含 OT 数），计算公式为： i=1
U
式中： 为 DGG 胶中条带数；P 为 第 i 条带灰度在
i
E
S
S Chao1 = S obs +n 1 (n 1 −1)/[2(n 2 +1)] （1） 该样品总灰度中的占比，%。
式中：S 1 为估计 的 OT U 数；S s 为实际观测到的
Chao ob 2 结果与讨论
OT 数；n 为只含 有 1 条序列 的 OT 数；n 为只含
1
2
U
U
2.1 出水基础指标变化特征
有 2 条序列 的 OT 数。
U
生物滤池中进出水 D O 浓度、ORP、p H 以及
香农（Shannon）指数是用来估算样品中微生物 CO 的变化如 图 2 所示。D 浓度是影响反硝化作
D
O
多样性的指数，计算公式为： 用的重要因素，大多数反硝化菌是兼性厌氧菌，在缺