Page 120 - 《环境工程技术学报》2022年第5期

· 1476 · 环境工程技术学报 第 12 卷

1.2 试验设计 影响。
用去离子水洗净植物根系，将植物根部表面附 1.4 根系活力与抗氧化系统指标测定
着的沉积物去除， 用 1/5 Hoaglan 营养液水 培 60 d 1.4.1 根系活力的测定
d
至植物生长稳定。选取生理表型一致的植株作为试 根系活力采 用 TT 法 [19 ] 测定。称取混合根系
C
验对象，在营养液中加 入 0、1、10、30、50、100 mg/L 样 品 0.5 g 放入遮光处理的试管中，加 入 0.4% TTC
不同浓度梯度 的 SM X 进行处理， 以 0 mg/ 为对照， 溶液和磷酸缓冲液等量混合 液 10 mL，使根充分浸
L
不同处理中水生植物的种植密度 为 1 株/m ，设置 没， 在 37 ℃ 水浴锅中保 温 3 后加 入 2 m 硫酸，对
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h
L
3 个平行， 每 5 更 换 1 次营养液，运行周期 为 60 照为先加硫酸再加根系。将根取出，吸干水分后与
d
d。试验 于 201 年在山东农业大学园艺实验站进 3～4 m 乙酸乙酯一起磨碎，将红色提取液移入试管
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L
行，自然光照，培养温度 为 20～25 ℃，湿度 为 60%～ 中，并将残渣洗涤干净，使最终体积 为 10 mL， 在 485
80%。试验的 前 30 d，对不同浓 度 SM 在 5 种植物 n m 下比色。
X
与根际微生物联合修复中的去除效果进行测定与分 1.4.2 抗氧化系统的测定
析。依 据 SM 的去除效果， 对 2 组去除效果较好的 称取 0.5 新鲜叶片，加入 2 m 磷酸缓冲液
L
g
X
植物，采集其叶片及根部进行植物活性氧、抗氧化系 (0.05 mol/L，p H 为 7.8)，冰浴研磨，转移至离心管
统的测定；并在人工模拟气候室中，调节温度分别为 中，再以 2 m 的缓冲液清洗研钵，4 ℃ 下 10 000
L
4、8、12、24 ℃，测定温度胁迫 下 2 种植物活性氧、 r/mi 离 心 20 mi 后，取上清液冷藏保存。依据汤叶涛
n
n
抗氧化系统的变化；对 2 种植物在 0 mg/L（CK）、 等 [20 ] 的研究方法测定丙二醛 (MDA)、过氧化氢
2−
1 mg/L（S1）、50 mg/L（S50）营养液培养下的根际微 (H O ) 和超氧阴离 子 (O ) 浓度。超氧化物歧化酶
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生物进行采集，进行微生物群落多样性分析。 (SOD)、过氧化物 酶 (POD 和过氧化氢 酶 (CAT 的
)
)
1.3 抗生素的测定 活性测定 与 Li 等 [21 ] 的方法相同。
u
1.3.1 色谱条件 1.5 高通量测序
使 用 液 相 色 谱 串 联 质 谱 LC-30AD+LCMS- 1.5.1 DN 提取
A
8060(Shimadzu，日本 测定抗生素浓度。色谱柱为 参 考 de Bulgarell 等 [22 ] 的方法，随机取植物根
)
i
InertSustainTM Bio-C18(2.1×100 mm，1.9 µm)，流动 部 (5 g 浸没于无 菌 PB 溶液中，180 r/mi 孵 育 10
S
)
n
相 A 相 为 0.1 % 甲 酸 ， B 相 为 乙 腈 ， 流 速 为 0.4 mi 后取出，此过程重 复 3 次， 将 3 次洗涤液汇总后
n
mL/min；柱温 为 40 ℃，进样量 为 2 µL，洗脱方式为 过 0.22 µ m 滤膜，收集滤膜备测植物根部微生物菌
梯度洗脱。梯度洗脱程序：0～1.0 min，90% A 相， 群。备测滤膜置于−80 ℃ 超低温冰箱，避光保存。
10% 相，流 速 0.40 mL/min；1.0～8.0 min，5% 相， 1.5.2 微生物多样性检测与分析
A
B
95% B 相 ， 流 速 0.40 mL/min；8.0 ～ 10.0 min，5% 根 据 E.Z.N.A.® soil DNA kit (Omega Bio-tek,
)
A 相，95% 相，流 速 0.40 mL/min；10.0～10.10 min， Norcross, GA, 美国 说明书进行 DNA 抽提，使用
B
90% 相，10% 相，流 速 0.40 mL/min。 1 % 的琼脂糖凝胶电泳检 测 DN A 的提取质量，使用
B
A
1.3.2 色谱条件 NanoDrop 2000 UV-vis spectrophotometer (Thermo
离子源 为 ESI，加热模块温度 为 400 ℃，雾化气 Scientific, Wilmington，美国 测定 DN A 浓度和纯
)
流速 为 3.0 L/min；干燥气流速 为 10.0 L/min，加热气 度。利用高通量测序技术对系统内的不同微生物聚
流 速 为 10.0 L/min； 扫 描 模 式 为 多 反 应 监测 集形态进行分析，引物由上海生工生物工程股份有
(multiple-reaction monitoring，MRM)，接口温度 为 300 限公司制备，PC 反应：预变性，95 ℃，3 min；变性，
R
℃，驻留时间 为 17 ms；D 温度 为 250 ℃。 95 ℃，30 s；退火，56 ℃，30 s；延伸，72 ℃，40 变性
L
s
1.3.3 标准曲线与检测限 至延伸步骤，重 复 3 次。序 列 F:TCCTACGGGAG
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抗生素检测采用内标法定量，内标物质为磺胺 GCAGCAGT； 序 列 R:GGACTACCAGGGTATCTA
甲恶唑-d4(SMX-d4)。各抗生素的标准曲线 为 f(x)= ATCCTGTT。 在 97 % 的相似水平下对所有序列进
383 987x+589 143，相关系 数 (R ) 为 0.996 8。检出限 行 OTUs (operational taxonomic units 划分并 与 RDP
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)
为 0.03 µg/L，定量限 为 0.10 µg/L，精密度 为 4.12%， (Ribosomal Database Project 数据库比对，基于此进
)
回收率 为 96.33%。样品抗生素检出限与定量限按照 行物种组成、Alph 多样性及群落结构分析。
a
信噪 比 3 倍 与 1 倍设定，分别进行了场地空白、方 1.6 数据统计分析
0
法空白和平行样试验，用于控制背景值影响及交叉 所有数据均采 用 Excel 201 软件进行预处理，
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